Blotlama, proteinlerin jel üzerinden bir membrana elektrik akımı kullanılarak transfer edildiği süreci ifade eder. Bu adım, antikorlar kullanılarak spesifik proteinlerin görselleştirilmesi ve analiz edilmesine öncül olarak kritik öneme sahiptir. Ayrıca, membran gerektiğinde yeniden aktive edilebilir; bu, jel için mümkün değildir.
Blotlama farklı bağlamlarda uygulanır:
- Northern Blot: RNA’nın transferi ve tespiti için.
- Southern Blot: DNA’nın transferi ve tespiti için.
- Western Blot: Proteinlerin transferi ve tespiti için.
Blotlama işleminden önce proteinlerin bir jel üzerinde ayrıştırılması gerekir. Blotlama sırasında jel ve membran bir “sandviç” yapısında düzenlenir. Tipik olarak sıralama şu şekildedir: bir sünger, iki filtre kağıdı, jel, membran, tekrar iki filtre kağıdı ve bir sünger daha, negatif (siyah) taraftan pozitif (kırmızı) tarafa doğru istiflenir.
Bu düzenlemenin mantığı, proteinlerin genellikle negatif yüklü olmasıdır. Elektrik alanında, negatif kutuptan pozitif kutba doğru hareket ederler. Bu nedenle, proteinlerin jel üzerinden membrandan dik bir şekilde transfer edilebilmesi için membranın jel önüne yerleştirilmesi gerekir.
Eğer yükler karıştırılırsa ne olur?
Eğer yükler karıştırılırsa veya membran jelin arkasına yerleştirilirse, ayrıştırılmış proteinler membrandan uzaklaşır ve doğru transfer gerçekleşmez.
Merhaba arkadaşlar,
Ben, tibbiterimler.com’un kurucularından biriyim. Amacımız, tıbbi bilgiyi daha anlaşılır ve basit bir şekilde sunmaktır. İnsanlar genellikle düşündüklerinden daha karmaşık hale getiriyorlar. Aksine, sadece anlayan biri basitleştirebilir.
Keyifli okumalar:)